L’immunodosage à polarisation de fluorescence (FPA) est un immunodosage homogène utile pour la détection rapide et précise d’un anticorps ou d’un antigène. Le principe du test est qu’un colorant fluorescent (attaché à un antigène ou à un fragment d’anticorps) peut être excité par une lumière polarisée dans le plan à la longueur d’onde appropriée.
A quoi sert la polarisation de fluorescence ?
La polarisation de fluorescence (FP) est une méthode homogène qui permet une analyse rapide et quantitative de diverses interactions moléculaires et activités enzymatiques.
Qu’est-ce que le test FP ?
La technologie de polarisation de fluorescence (FP) est basée sur la mesure de la rotation des molécules et a été largement utilisée pour étudier les interactions moléculaires en solution. Cette méthode peut être utilisée pour mesurer la liaison et la dissociation entre deux molécules si l’une des molécules de liaison est relativement petite et fluorescente.
La fluorescence est-elle polarisée ?
La polarisation de fluorescence est une moyenne pondérée des deux valeurs, fournissant une évaluation directe de la fraction de liaison molécule/ligand. Ainsi, les mesures de polarisation de fluorescence indiquent également la formation de complexes molécule/ligand plus grands. Illustration 4.5. Principe de polarisation de fluorescence.
Comment mesure-t-on l’immunodosage à polarisation de fluorescence ?
Les immunoessais à polarisation de fluorescence utilisent un antigène lié à un fluorophore qui, lorsqu’il est lié à l’anticorps d’intérêt, augmente la polarisation de la fluorescence. Le changement de polarisation est proportionnel à la quantité d’antigène dans l’échantillon et est mesuré par un analyseur de polarisation de fluorescence.
Pourquoi l’immunodosage par polarisation de fluorescence est-il important ?
L’immunodosage à polarisation de fluorescence (FPA) est un immunodosage homogène utile pour la détection rapide et précise d’un anticorps ou d’un antigène. Parce qu’il s’agit d’une interaction primaire antigène-anticorps, la vitesse de réaction est très rapide et généralement un résultat peut être obtenu en quelques minutes.
Comment fonctionne l’anisotropie de fluorescence ?
L’anisotropie de fluorescence ou la polarisation de fluorescence est une mesure du changement d’orientation d’une molécule dans l’espace, par rapport au temps entre les événements d’absorption et d’émission. Plus le mouvement est lent, plus la lumière émise conserve la polarisation.
Comment fait-on l’anisotropie de fluorescence ?
Expériences d’anisotropie de fluorescence Les mesures ont été effectuées à 25 ° C dans une cuvette de 200 µl avec une longueur de trajet de 5 mm 10. Dans une cuvette de fluorescence, placez 200 µl de SBDS-FlAsH 30 nM dans un tampon d’anisotropie et titrez 2 µl de 30 µM EFL1. Bien mélanger et laisser reposer la réaction pendant 3 min avant de mesurer la valeur d’anisotropie.
Qu’est-ce que le médicament et la PF ?
Les essais de polarisation de fluorescence (essais FP) sont utilisés de diverses manières. De la découverte de molécules en solution à la surveillance des niveaux de médicaments en milieu clinique, en passant par la découverte de médicaments. De plus, les scientifiques utilisent la FP pour étudier la liaison petite molécule-protéine, antigène-anticorps et hormone-récepteur.
Qu’est-ce qu’un test FP compétitif ?
L’immunodosage compétitif FA/FP est utilisé pour la détection de petites molécules dans de nombreux domaines, tels que le dépistage des inhibiteurs, le suivi des médicaments thérapeutiques et la détection des pesticides et des toxines [4], [5]. Cet immunodosage utilise un immunoanticorps comme ligand d’affinité et une petite molécule cible marquée par un fluorophore comme traceur.
Qu’est-ce que la spectroscopie de polarisation de fluorescence ?
La spectroscopie de polarisation de fluorescence est l’une de ces méthodes, qui étudie la relation entre la polarisation de la lumière utilisée pour l’excitation et la lumière qui est ensuite détectée à partir de la fluorescence.
Qu’est-ce que la fluorescence résolue dans le temps ?
Fluorescence d’un échantillon suivie en fonction du temps après excitation par une impulsion lumineuse. Pour lever l’ambiguïté, cette procédure est souvent appelée mesure de la durée de vie de la fluorescence.
Qu’est-ce qu’un fluorochrome et comment est-il utilisé ?
Les colorants fluorescents (ou fluorochromes) sont couramment utilisés comme réactifs de détection dans diverses applications telles que l’imagerie cellulaire et la cytométrie en flux. Les fluorochromes absorbent l’énergie lumineuse d’une longueur d’onde spécifique et la réémettent à une longueur d’onde plus longue. Les fluorochromes diffèrent par l’intensité à laquelle ils émettent de la lumière.
Qu’est-ce que l’analyse FRET ?
Le FRET repose sur le transfert d’énergie dépendant de la distance d’une molécule donneuse à une molécule acceptrice. En raison de sa sensibilité à la distance, le FRET a été utilisé pour étudier les interactions moléculaires. FRET est la transmission d’énergie sans rayonnement d’une molécule donneuse à une molécule acceptrice.
Pourquoi la fluorescence se produit-elle ?
La fluorescence se produit lorsque les électrons reviennent d’un état excité singulet à l’état fondamental. Mais dans certaines molécules, les spins des électrons excités peuvent être commutés vers un état triplet dans un processus appelé croisement inter-systèmes. Ces électrons perdent de l’énergie jusqu’à ce qu’ils soient dans l’état fondamental du triplet.
Quel type de lumière la microscopie à fluorescence utilise-t-elle ?
La plupart des microscopes à fluorescence utilisés en biologie aujourd’hui sont des microscopes à épi-fluorescence, ce qui signifie que l’excitation et l’observation de la fluorescence se produisent au-dessus de l’échantillon. La plupart utilisent une lampe à décharge en arc au xénon ou au mercure pour la source de lumière la plus intense.
Quels sont les différents procédés d’extinction de fluorescence connus ?
L’extinction de fluorescence fait référence à tout processus qui diminue l’intensité de fluorescence d’un échantillon. Une variété d’interactions moléculaires peut entraîner l’extinction. Celles-ci incluent les réactions à l’état excité, les réarrangements moléculaires, le transfert d’énergie, la formation de complexes à l’état fondamental et l’extinction par collision.
Quelle est la plage des valeurs d’anisotropie ?
Les valeurs d’anisotropie peuvent dépasser 0,4 pour une excitation multiphotonique (Chapitre 18). où β est l’angle entre les transitions d’absorption et d’émission. Le terme r0 est utilisé pour désigner l’anisotropie observée en l’absence d’autres processus de dépolarisation tels que la diffusion rotationnelle ou le transfert d’énergie.
Dans quelles conditions l’intensité de la fluorescence est-elle proportionnelle à la concentration ?
Spectroscopie de fluorescence Dans des conditions où la densité optique est inférieure à 0,07, l’intensité de fluorescence est proportionnelle à la concentration, et il est donc tout à fait commode de comparer plusieurs spectres de fluorescence entre eux.
Qu’est-ce que l’anisotropie négative ?
Une valeur négative signifie que l’intensité de fluorescence perpendiculaire était supérieure à l’intensité parallèle. L’anisotropie négative est une possibilité. Les valeurs peuvent être comprises entre -0,2 et +0,4.
Comment fonctionne l’immunodosage par fluorescence ?
Les dosages immunologiques fluorescents sont simplement un type différent de dosage immunologique. Un immunodosage fluorescent moderne utilise comme réactif de détection un composé fluorescent qui absorbe la lumière ou l’énergie (énergie d’excitation) à une longueur d’onde spécifique, puis émet de la lumière ou de l’énergie à une longueur d’onde différente.
Comment fonctionne l’immunodosage enzymatique ?
Les dosages immunologiques enzymatiques (EIA) sont utilisés pour visualiser et quantifier les antigènes. Ils utilisent un anticorps conjugué à une enzyme pour lier l’antigène, et l’enzyme convertit un substrat en un produit final observable. Le substrat peut être soit un chromogène, soit un fluorogène.
Comment fonctionne le dosage immunologique Cedia ?
Un dosage immunologique de donneur d’enzyme cloné (CEDIA) est un dosage immunoenzymatique homogène compétitif. Ce dosage utilise deux fragments composants d’une enzyme qui sont chacun individuellement inactifs. La compétition pour l’anticorps se produit entre l’analyte dans l’échantillon et le conjugué enzyme-fragment-analyte.
Comment fonctionne la technique d’immunodosage à multiplication enzymatique ?
La technique d’immunodosage à multiplication enzymatique (EMIT®) est une méthode homogène simple et rapide, couramment utilisée aujourd’hui pour mesurer un large éventail de substances (en particulier des médicaments). La technique fonctionne sur la base que le médicament présent est proportionnel à l’inhibition d’une réaction de substrat enzymatique.