La solution de perméation de saponine est préparée en mélangeant et en dissolvant 0,5 g de saponine avec 100 ml de PBS 5X (pH 7,4), suivi d’une filtration submicronique et/ou d’un autoclavage à 15 PSI pendant 60 minutes.
Comment faire une solution de saponine à 10 % ?
Stock de saponine à 10 % : mélanger 5 g de saponine (Sigma #S-7900) dans 50 ml de CMF-PBS. Placer à 37˚C jusqu’à dissolution complète de la saponine. Utilisez une seringue de 50 ml avec une cartouche filtrante jetable de 0,2 μm pour filtrer la solution.
Comment prépare-t-on une solution de saponine à 1 % ?
Utilisation : 1) Préparez une solution de travail 1x en diluant la solution FACSLyse 10x avec de l’eau distillée. un. Par exemple, ajoutez 1 ml de bouillon 10x à 9 ml d’eau distillée.
Comment dissoudre le polyhème?
Par exemple, dissoudre 2,4 grammes de polyhema dans 20 ml d’éthanol à 95 % (dans un tube Falcon de 50 ml). Ensuite, scellez-le avec du parafilm et mettez une roue à 55 degrés Celsius pendant une nuit. Cette solution est 10X. Diluer 1:10 dans de l’éthanol à 95 % pour obtenir la solution finale à 1,2 %.
Comment fabrique-t-on de la saponine à 5 % ?
Pour créer une solution à 5 % p/v (10x), dissoudre 5 grammes de saponine (Sigma 47036-50g-F) dans 80 ml d’eau. Bien mélanger jusqu’à dissolution en secouant toute la nuit à 4 deg C. q.v. 100 ml, filtrer stériliser à travers un filtre de 0,2 um et conserver à 4 degrés C.
Comment fabrique-t-on le polyHEMA ?
Pour préparer la solution de polyHEMA, pesez 1,5 g de polyHEMA et placez-le dans un flacon stérile. Ajouter 95 ml d’éthanol absolu de qualité biologie moléculaire et 5 ml d’eau distillée de qualité culture cellulaire. L’hydrogel polyHEMA se dissoudra dans l’eau contenue dans la solution et l’éthanol stérilisera la préparation.
Comment prépare-t-on une solution mère d’hygromycine ?
Instructions de préparation L’hygromycine B est soluble dans l’eau à > 50 mg/mL. 2 Il est également soluble dans le méthanol ou l’éthanol. Les solutions doivent être stérilisées par filtration et non par autoclavage. L’hygromycine B est dissoute dans de l’eau à 50 mg/mL, puis filtrée stérilement pour produire du H 0654, ou irradiée aux rayons gamma pour produire du H 5527.
Comment préparez-vous la solution mère de puromycine?
Ce produit est soluble dans l’eau à 50 mg/mL. Une solution mère doit être préparée par filtration à l’aide d’un filtre de 0,22 μm, puis conservée en aliquotes à -20°C. Ce produit est également soluble dans le méthanol à 10 mg/mL.
Comment préparer un tampon de perméabilisation ?
A. 1X Phosphate Buffered Saline (PBS) : Pour préparer 1 L de PBS 1X : ajouter 100 ml de PBS 10X (#12528) à 900 ml d’eau, mélanger. Tampon de perméabilisation cellulaire : Achetez le prêt à l’emploi (n° 39487) ou pour préparer 10 ml, ajoutez 30 µl de Triton™ X-100 à 10 ml de tampon de dilution d’anticorps. Conserver à 4°C.
Comment préparez-vous une solution mère de collagénase?
Pour mesurer l’activité enzymatique, une solution mère d’enzyme est préparée en dissolvant 0,05 à 0,1 mg/ml de collagénase dans un tampon TES 50 mM, pH 7,4 (37 ºC), contenant 0,36 mM de chlorure de calcium. Les concentrations finales dans le mélange réactionnel sont de 50 mM de TES, 0,36 mM de chlorure de calcium, 25 mg de collagène (Produit No.
Qu’est-ce que l’extrait de saponine ?
Les saponines sont à la fois solubles dans l’eau et dans les graisses, ce qui leur confère leurs propriétés de savon utiles. Quelques exemples de ces produits chimiques sont la glycyrrhizine, arôme de réglisse ; et quillaia (alt. quillaja), un extrait d’écorce utilisé dans les boissons.
Que fait la saponine aux cellules?
La saponine, une molécule semblable à un détergent, peut perméabiliser les membranes cellulaires sans les détruire, et peut donc être utilisée pour la détection d’antigènes intracellulaires sur des cellules intactes avec un cytomètre en flux.
Peut-on perméabiliser les cellules sans les fixer ?
Les antigènes proches de la membrane plasmique et les antigènes cytoplasmiques solubles nécessiteront une légère perméabilisation cellulaire sans fixation. Les antigènes cytosquelettiques, viraux et certains enzymes donnent généralement des résultats optimaux lorsqu’ils sont fixés avec une concentration élevée d’acétone, d’alcool ou de formaldéhyde.
Qu’est-ce qu’un tampon de perméabilisation ?
Description du produit. Le tampon de perméabilisation est un tampon de perméabilisation prêt à l’emploi pour la coloration par immunofluorescence intracellulaire pour la microscopie ou la cytométrie en flux. Solution détergente tamponnée prête à l’emploi. Perméabilisez les cellules fixées pour les applications de microscopie et de cytométrie en flux.
Comment perméabiliser une cellule ?
La perméabilisation des cellules par fixation au méthanol ou à l’acétone, ou à l’aide d’un détergent, permet aux anticorps de traverser la membrane cellulaire et d’entrer dans la cellule. Le réactif le plus couramment utilisé pour la perméabilisation cellulaire est un détergent non ionique, le Triton X-100.
Dans quoi diluez-vous la puromycine?
À l’aide d’un stock de 1 mg/ml de puromycine, préparer cinq dilutions à 2x la concentration finale, en diluant le stock dans les médias comme indiqué dans le tableau 1, colonne C & D. (Lorsque la concentration d’antibiotique 2x est diluée avec un volume égal de suspension cellulaire, il donnera la concentration finale indiquée dans le tableau 1, colonne B).
Comment fonctionne la sélection de la puromycine ?
Ce composé agit en interrompant la synthèse des protéines dans les cellules procaryotes et eucaryotes. Cela provoque la mort des cellules, à moins qu’elles ne possèdent un gène de résistance, leur permettant de survivre à l’exposition à l’antibiotique.
Comment dissoudre la poudre de puromycine ?
Instructions de préparation Le produit est soluble dans l’eau (50 mg/ml), donnant une solution limpide, incolore à légèrement jaune. La solution mère peut être passée à travers un filtre de 0,22 µm et stockée en aliquotes à –20 °C. Il est également soluble dans le méthanol (10 mg/ml).
Qu’est-ce que le poly Hema ?
polyHEMA, en méthacrylate de poly-2-hydroxyéthyle, un plastique souple, flexible et absorbant l’eau utilisé pour fabriquer des lentilles de contact souples.
Peut-on colorer les cellules sans les fixer ?
Gardez à l’esprit que sans fixation, votre échantillon pourrait se désintégrer ou vous pourriez perdre des épitopes. Vous pouvez faire la coloration pour le marqueur extracellulaire POST fixation/perméabilisation/coloration intracellulaire. Dans ce cas, la fixation n’affectera pas le fluorochrome (par exemple APC-Cy7).
À quelle vitesse pouvez-vous faire tourner des cellules fixes ?
Centrifuger pendant 5 minutes à 1 500–2 000 tr/min. Les cellules deviennent plus flottantes après fixation. Si la pastille est trop petite, essorez à nouveau à un régime plus élevé, mais ne dépassez pas 3 000 tr/min.
Pouvez-vous perméabiliser des cellules vivantes ?
En plus de perméabiliser la membrane des cellules mortes fixées, le TX100 peut également perméabiliser les cellules vivantes pour délivrer des molécules qui ne peuvent pas pénétrer les membranes cellulaires intactes. La littérature précédente a rapporté que la perméabilisation réversible de la membrane peut être réalisée lorsque le TX100 à faible dose est utilisé.
La Digitonine est-elle réversible ?
Une faible concentration de digitonine induit une perméabilisation réversible de la membrane plasmique dans les cellules somatiques bovines, murines et porcines. Nos résultats suggèrent que la perméabilisation réversible avec la digitonine peut être utilisée pour induire une reprogrammation nucléaire et pour activer des gènes pluripotents par un système acellulaire.
Comment réparer les cellules ?
Pour fixer avec des solvants organiques, utilisez du méthanol glacé, de l’éthanol ou un mélange 1:1 d’éthanol et de méthanol pour couvrir les cellules sur vos lamelles. Une fois couverts, incubez vos cellules au congélateur (-20°C) pendant 5 à 7 minutes. Ne vous souciez pas de garder vos cellules stériles à ce stade – vous les tuez !
Le glutaraldéhyde est-il perméabilisant ?
Afin de détecter les antigènes intracellulaires, les cellules doivent d’abord être perméabilisées notamment après fixation avec des agents de réticulation tels que le formaldéhyde et le glutaraldéhyde. Parce que les solvants organiques coagulent également les protéines, ils peuvent être utilisés pour fixer et perméabiliser les cellules en même temps.